O ensaio imunoenzimático consiste na reação de anticorpos presentes nos soros ou plasmas com antígenos solúveis e purificados obtidos a partir de cultura in vitro.
Os antígenos obtidos são previamente adsorvidos nas cavidades de microplacas (fase sólida). Caso as amostras possuam anticorpos específicos, estes irão se ligar aos antígenos da fase sólida.
Na etapa seguinte, deve-se adicionar um conjugado específico, anti imunoglobulina, marcado com a enzima peroxidase.
Na presença de anticorpos específicos, ocorrerá a ligação conjugado-anticorpo, que poderá ser evidenciada com a adição de uma substância cromógena (tetrametilbenzidina-TMB).
A peroxidase juntamente com o peróxido de hidrogênio formará um composto de coloração azul turquesa que ao adicionar-se o ácido sulfúrico, interrompe a reação e passa a apresentar uma coloração amarela, positivo (reagente).
Nas cavidades que não houver anticorpos específicos, não haverá desenvolvimento de cor o que caracteriza uma reação negativa (não reagente). Os resultados podem ser avaliados por meio de um espectrofotômetro para microplaca em comprimento de onda de 450 nm.